Nuevas Metodologías en Conservación

metodología

Para lograr alcanzar los objetivos desarrollamos un conjunto de cebadores especie-específicos que permiten amplificar fragmentos diagnósticos de ADN ambiental para cada una de las especies. Pero antes, es necesario realizar trabajo de campo en todo el oeste de Patagonia, desde Neuquén hasta Santa Cruz. Entre los sitios de muestreo se incluyen siete parques nacionales y muchas otras localidades cercanas. Para cada una de las especies se trabaja en diez sistemas de agua (ríos, lagos o lagunas según sea lo adecuado para cada especie que trabajamos). En cada sistema se definen entre uno a cinco sitios de muestreo separados por 10 km, 5 Km y 1Km dependiendo el área de acción de cada especie. En cada sitio de muestreo se recolectan por triplicado entre uno y diez litros de agua en botellas plásticas estériles. Las muestras de agua obtenidas se filtran en el campo, y cada filtro se conservará por separado para la posterior extracción del ADN. También en cada sitio se evalúa la presencia de las especies en base a metodologías específicas no invasivas para cada una. Por ejemplo, para el Huillín se recorre una transecta de 600 m en búsqueda de rastros (heces o huellas). En los sitios de muestreo de Pato de Torrentes se recorre una distancia de 1 km para el registro visual de individuos. Por último, en los sistemas con posible presencia de Gallineta Chica se utiliza la técnica de playback. Para la extracción de ADN de cada filtro, se trabaja en el laboratorio. Posteriormente y de forma independiente para cada especie de estudio en ADN obtenido lo utilizamos para ensayar la amplificación por PCR de los fragmentos mitocondriales, utilizando los cebadores seleccionados previamente. Las secuencias obtenidas por amplificación por PCR las comparamos con las previamente obtenidas a partir de las muestras de tejidos con el fin de verificar que el ADN amplificado y secuenciado corresponde a las especies de estudio. Adicionalmente, se compara estadísticamente la eficiencia de la técnica de ADNa teniendo en cuenta las características de los distintos cuerpos de agua y la eficiencia en comparación con las otras técnicas de muestreo no invasivo.